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維多珠ELISA試劑盒標準化操作流程全解析

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  在免疫檢測領域,維多珠ELISA試劑盒憑借高特異性、強抗干擾性和微量樣本適配性,成為科研與臨床檢測的“利器”。但實驗結果的高度可重復性,離不開標準化的操作流程(SOP)。本文梳理關鍵步驟與注意事項,助您高效完成檢測。
 
  一、實驗前準備:細節決定成敗
 
  首先核對試劑盒組分(酶標板、標準品、抗體預混液、顯色劑等)是否齊全,檢查有效期及儲存條件(通常2-8℃避光保存)。根據樣本量選擇合適規格酶標板(如96孔板),提前30分鐘取出平衡至室溫(25℃左右)。樣本需按說明書要求預處理:血清/血漿需離心去除沉淀,細胞上清需過濾除菌,避免反復凍融(建議分裝保存于-80℃)。
 
  二、加樣與孵育:精準控制是關鍵
 
  1.標準曲線制備:用稀釋液將標準品梯度稀釋(通常設6-8個濃度點),每孔加入100μL,注意“從低到高”順序避免交叉污染;空白孔僅加稀釋液。
 
  2.樣本加樣:待測樣本按預估濃度稀釋后,每孔加入100μL(建議做復孔,減少誤差);若樣本濃度過高,需進一步稀釋至標準曲線線性范圍內。
 
  3.封閉與孵育:每孔加入200μL封閉液(如5%脫脂奶粉),37℃孵育60分鐘(或室溫1小時),阻斷非特異性結合位點。
 
  三、檢測反應:時間與溫度嚴把控
 
  棄去孔內液體,洗板3次(每次300μL洗滌液,浸泡30秒),拍干。加入生物素標記的維多珠抗體預混液100μL/孔,37℃孵育30分鐘;重復洗板后,加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的鏈霉親和素100μL/孔,37℃孵育20分鐘。較后洗板5次確保無殘留,加入顯色底物(如TMB)100μL/孔,避光反應15-20分鐘(密切觀察顏色變化,避免過顯色)。
 
  四、終止與讀數:規范操作保準確
 
  加入終止液(如2M H?SO?)50μL/孔終止反應,立即用酶標儀測定450nm波長處的吸光度(OD值)。以標準品濃度為橫坐標、OD值為縱坐標擬合標準曲線,計算樣本濃度時需乘以稀釋倍數。
 
  注意事項:全程避免氣泡產生(影響吸光度);不同批次試劑盒勿混用;實驗需在潔凈臺內操作,防止微生物污染。遵循此SOP,可顯著提升維多珠ELISA試劑盒的檢測穩定性與數據可靠性,為后續分析提供堅實基礎。
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